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    你對熒光定量PCR了解了多少

  • 發(fā)布日期:2019-11-20      瀏覽次數(shù):1414
    •    提到PCR,相信在實驗室待過的同學(xué)并不會很陌生,這個由美國科學(xué)家Mullis在1985年發(fā)明的聚合酶鏈反應(yīng),至今在世界范圍內(nèi)都有廣泛的應(yīng)用,作為生物學(xué)實驗的一個重要的方法,其有著不可估量的作用。
        什么是熒光定量PCR
        我們知道,DNA有著雙螺旋結(jié)構(gòu),當(dāng)溫度達到95攝氏度時,雙鏈的DNA會分解成為單鏈狀態(tài),而在溫度到達72攝氏度左右時,DNA聚合酶會沿著磷酸到五碳糖的方向進行合成。聚合酶鏈反應(yīng)PCR就是通過不斷地調(diào)節(jié)溫度,以數(shù)量級的速度增加DNA數(shù)量的方法。
        而實時熒光定量PCR是指,在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團,利用熒光信號的變化實時監(jiān)測PCR擴增反應(yīng)中每一個循環(huán)擴增產(chǎn)物量的變化,通過Ct值和標(biāo)準(zhǔn)曲線的關(guān)系對起始模板進行定量分析。
        實時熒光定量常用的熒光化學(xué)分類有染料法和探針法。其中,探針法可以更加地對需要檢測的DNA片段進行染色,一般情況下,探針法的特異性更高。
        熒光定量PCR的價值
        事實上,大多數(shù)病毒在感染動物以后,會在感染后的7天左右產(chǎn)生特異性抗體。此后,當(dāng)同種病毒再次入侵時,機體會迅速的產(chǎn)生高水平抗體,以中和這些病毒。這個過程被稱為機體的特異性免疫反應(yīng)。
        依照生物體的這個特點,一般情況下,科學(xué)家會采用PCR或酶標(biāo)進行實驗檢測。但也有意外,比如目前國內(nèi)較為流行且對養(yǎng)豬業(yè)造成慘重損失的“非洲豬瘟病毒”,該病毒的自然宿主只有家豬,野豬,鈍緣軟蜱,但除豬只本身之外,人、車、物、料、等環(huán)境中攜帶有非洲豬瘟病毒都會造成非洲豬瘟的傳播,進而威脅到豬群的安危。
        更為可怕的是,這種病毒侵入豬只體內(nèi)后,豬只在產(chǎn)生抗體之前就會走向死亡,死亡率高達90%~100%,自2018年非洲豬瘟進入中國以來,將近一年時間,對我國畜牧業(yè)造成了上百億的損失。此時,由于酶標(biāo)法檢測的是動物產(chǎn)生抗體后的感染情況,顯然,對待這種烈性病毒來言,其價值遠遠低于熒光定量PCR。
        熒光定量PCR有著高靈敏性、高度、方便省時等特點,他可以在短時間內(nèi),將一個微量的特種DNA擴增到一個足以監(jiān)測到的數(shù)量級。由于在體內(nèi)達到一定數(shù)量級會造成生物體死亡,這相當(dāng)于是在和動物體內(nèi)的病毒賽跑,以達早發(fā)現(xiàn),早處理的效果。
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