熒光定量PCR檢測(cè)廠家

熒光定量PCR檢測(cè)廠家與普通PCR的區(qū)別：理論上PCR是一個(gè)指數(shù)增長的過程，但是實(shí)際的PCR擴(kuò)增曲線并不是標(biāo)準(zhǔn)的指數(shù)曲線，而是S形曲線。

熒光定量PCR檢測(cè)廠家這是因?yàn)殡S著PCR循環(huán)的增多，擴(kuò)增規(guī)模迅速增大，Taq酶、dNTP、引物，甚至DNA模板等各種PCR要素逐漸不敷需求，PCR的效率越來越低，產(chǎn)物增長的速度就逐漸減緩。當(dāng)所有的Taq酶都被飽和以后，PCR就進(jìn)入了平臺(tái)期。由于各種環(huán)境因素的復(fù)雜相互作用，不同的PCR反應(yīng)體系進(jìn)入平臺(tái)期的時(shí)機(jī)和平臺(tái)期的高低都有很大變化，難以精確控制。所以，即使是96次PCR重復(fù)實(shí)驗(yàn)，各種條件基本*，所得結(jié)果有很大差異，所以在實(shí)驗(yàn)過程中我們不能根據(jù)zui終PCR產(chǎn)物的量直接計(jì)算出起始DNA拷貝數(shù)。
技術(shù)于1996年由美國Applied Biosystems公司推出，由于該技術(shù)不僅實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強(qiáng)、有效解決PCR污染問題、自動(dòng)化程度高等特點(diǎn)，目前已得到廣泛應(yīng)用;實(shí)時(shí)熒光定量
的方法：熒光定量PCR所使用的熒光化學(xué)可分為兩種：熒光探針和熒光染料。而熒光定量 PCR 的方法相應(yīng)的可分為特異類和非特異類兩類，特異性檢測(cè)方法是在PCR反應(yīng)中利用標(biāo)記熒光染料的基因特異寡核苷酸探針來檢測(cè)產(chǎn)物；而非特異性檢測(cè)方法是在在PCR反應(yīng)體系中，加入過量熒光染料，熒光染料特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后，發(fā)射出熒光信號(hào)。前者由于增加了探針的識(shí)別步驟，特異性更高，但后者則簡便易行。